?Brainbits Hibernate 培養基是一種不依賴于 CO₂ 的營養培養基，用于維持神經細胞、組織和組織切片。Hibernate  培養基已進行優化，可用于在環境二氧化碳水平中維持成熟和不成熟細胞或組織。Brainbits Hibernate 培養基可讓神經元在環境 CO2 水平下維持長達 48 小時。這為科學家在運行臺式活細胞實驗時提供更大的便利和控制，比如顯微鏡、流式細胞分析以及其他生理學研究。Brainbits Hibernate 培養基還可在冷藏環境下保存具有活性的大腦組織直至處理達 1 個月，以及維持組織切片。

Hibernate A 和 Hibernate E的區別

Brainbits Hibernate 培養基有兩種類型，Hibernate A 和 Hibernate E。

Hibernate-E is useful for embryonic tissue while Hibernate-A is useful for adult tissue.

Brainbits Hibernate A培養基用于出生后組織樣品。A就是Adult，成年人或者成年動物。

Brainbits Hibernate E培養基用于胚胎神經元使用。A就是Embryo，胚或者胚胎。

Brainbits Hibernate 培養基兩種產品的配方相似，主要的區別的在于滲透壓，Hibernate A培養基的滲透壓范圍高于 Hibernate E培養基。

Hibernate E minus Calcium和Hibernate A minus Calcium的區別

兩者都是 Hibernate E培養基和Hibernate A培養基的基礎上，不含鈣離子。

Hibernate A minus Calcium培養基的實物圖片

Hibernate E minus Calcium培養基的實物圖片

培養大鼠胚胎海馬神經元和大腦皮層神經元

1. 從受精18天的大鼠胚胎中分離大腦皮層和雙側海馬

2. 在預置了Hibernate E培養基（Brainbits，靶點科技）的錐形管中收集所有的組織。放置，直到所有的組織都已解體。

3. 使組織沉積在管的底部，然后小心地去除上清液，只留下剛好可覆蓋組織的最少量的培養基。

4. 在不含鈣離子的Hibernate E minus Calcium培養基（Brainbits，靶點科技）中，使用2 mg/mL過濾滅菌的木瓜蛋白酶溶液，在30°C酶解組織大約30 min，其間每5 min輕搖錐形管以幫助降解。每對海馬組織使用2 mL酶溶液。

5. 加入兩倍體積的Hibernate E培養（Brainbits，靶點科技）基以恢復二價陽離子的濃度，停止酶解。

6. 使未解離的組織沉降至管底（約2 min），然后把上清液轉移到15 mL離心管中，以150×g離心5 min。

7. 在1 mL神經元培養基中重懸沉淀物，取一小份(例如10 μL)進行細胞計數。

大鼠胚胎原代海馬和皮層神經元操作步驟

1. 用無菌的冷的0.05 mg/mL多聚賴氨酸水溶液包被培養表面(玻璃或細胞培養級塑料)，每平方厘米表面使用0.15 mL，在室溫下保溫1 h。

2. 去除多聚賴氨酸溶液，并用無菌蒸餾水沖洗兩次(須清洗，因為多聚賴氨酸對細胞有毒性)。在超凈工作臺中打開培養板的蓋子通風，直到每個孔都干燥。培養板干燥后可以立即使用或在4°C最多保存2周。

3. 根據標準實驗室程序或隨細胞提供的說明書分離原代的大鼠神經元或解凍凍存的原代大鼠神經元。

4. 在預熱的(37°C)神經元培養基中接種細胞，建議的細胞密度為160個細胞/mm2，或必要時使用自行優化的細胞密度。對于海馬神經元，培養基中須添加25 μM L-谷氨酸

5. 在36°C至38°C，含5%二氧化碳的潮濕環境中培養（使用自然空氣也是可接受的，但推薦含9%氧氣和5%二氧化碳的氣體環境）。

6. 培養4-24 h后，更換一半體積的新鮮培養基，繼續在培養箱中培養。

7.對海馬神經元以外的細胞：在接種4天后，更換一半體積的新鮮的培養基，之后每三天重復一次。對海馬神經元：接種三天后，用不含L-谷氨酸的新鮮培養基更換一半體積的培養基。之后每三天重復一次。